PCR-analyse voor hepatitis C

Virale hepatitis C is een van de gevaarlijkste en moeilijkst te diagnosticeren ziekten. Het probleem is dat deze ziekte vaak pas in latere stadia wordt ontdekt vanwege het feit dat de hoofdvorm chronisch is en CHC asymptomatisch is. Het is echter een vroege diagnose die u in staat stelt de meest geschikte behandeling te kiezen die u zal helpen de virale leverontsteking voor altijd te vergeten..

Een van de meest veelzijdige methoden om HCV te bepalen, is de polymerasekettingreactie (PCR). Maar wat is PCR-analyse voor hepatitis C? Wat zijn de kenmerken van deze test? Hoe verschilt PCR-analyse voor hepatitis C kwalitatief van kwantitatief? Hoe wordt het testresultaat ontcijferd? In ons artikel vindt u antwoorden op al deze vragen..

Diagnostiek van HCV door PCR

De polymerasekettingreactie is een van de meest gebruikelijke en nauwkeurige methoden voor het diagnosticeren van HCV. Maar wat laat een PCR-test voor hepatitis C zien? De testresultaten maken het mogelijk om de aanwezigheid van flavavirus in het lichaam van de gastheer te bepalen, evenals de mate van virale lading in zijn lichaam..

Voor de analyse wordt een monster van het veneuze bloed van de patiënt gebruikt dat op de dag van het onderzoek is afgenomen. Het doen van een PCR-test voor hepatitis C wordt aanbevolen voor de volgende categorieën mensen:

  • Patiënten met gedetecteerde immunoglobulinen tegen antigenen van de veroorzaker van HCV
  • Voor vrouwen tijdens de zwangerschap
  • Medische hulpverleners die constant in contact komen met geïnfecteerde lichaamsvloeistoffen
  • Patiënten met een voorgeschiedenis van eerder genezen virale hepatitis
  • Patiënten met duidelijke symptomen van leverschade

Hepatitis C PCR-test kan kwalitatief of kwantitatief zijn. Beide methoden worden actief gebruikt bij de diagnose van HCV. Laten we de kenmerken van de kwalitatieve en kwantitatieve PCR-analyse voor hepatitis C nader bekijken.

Kwalitatief testen

Een kwalitatieve respons wordt uitgevoerd als een eerder vastgestelde HCV-diagnose bevestiging vereist. Testresultaten kunnen positief en negatief zijn. Een positieve reactie duidt op de aanwezigheid van een infectieus agens in het lichaam van de patiënt. Een negatief resultaat duidt op zijn beurt op de afwezigheid van de ziekteverwekker of op de onbeduidende concentratie ervan..

Wat is PCR voor hepatitis (kwalitatieve assay)? Dit onderzoek helpt om de diagnose definitief vast te stellen. De kosten van de implementatie in Moskou variëren, afhankelijk van de kliniek, van 1800 tot 3000 roebel.

Kwantitatieve reactie

Bloed voor kwantitatieve polymerasekettingreactie wordt gedoneerd als de diagnose al is gesteld. Met de analyse kunt u op dit moment de pathogene belasting in het lichaam van de patiënt bepalen. De behandelende arts ontvangt dus informatie over welk gebied van de lever wordt beïnvloed door het flavavirus en kan het therapeutische regime selecteren dat in een bepaald geval vereist is..

Hoe hoger de parameters van de ziekteverwekker in het bloed van de patiënt, hoe ernstiger het stadium van de ziekte zal moeten worden behandeld. De kosten van een kwantitatieve polymerasekettingreactie in klinieken in Moskou variëren van 1.800 tot 4.000 roebel, afhankelijk van de keuze van een medische faciliteit.

Voorbereiding op de hepatitis C PCR-test

Dus het antwoord op de vraag "Wat is PCR-analyse voor hepatitis C?" gevonden. Maar hoe bereid je je voor op de aanstaande diagnose? Bij de voorbereiding om een ​​bloedmonster te doneren voor een hepatitis C PCR-test, dient de patiënt:

  • Een paar dagen voordat u in het laboratorium aankomt, moet u fastfood en ander zwaar en vet voedsel volledig verlaten
  • Drink geen alcohol en rook niet binnen 24 uur voordat u de PCR-test voor hepatitis C uitvoert
  • Eet 8 uur vóór de diagnose niet eten
  • Zorg er voor uw eigen veiligheid voor dat de gezondheidswerker alleen een steriele wegwerpspuit gebruikt voordat u een injectienaald in een ader steekt.

Er wordt heel weinig bloed afgenomen voor de polymerasekettingreactie. Daarom heeft de patiënt na de procedure geen revalidatie nodig. Daarom gaat de patiënt onmiddellijk na de procedure naar huis. De diagnose wordt 's ochtends uitgevoerd.

PCR-analyse decoderen

Het decoderen van de PCR-test voor hepatitis C wordt uitgevoerd in een medisch laboratorium. De foutenmarge in de eindresultaten hangt af van de bekwaamheid van gezondheidswerkers, en ook van hoe de proefpersoon de regels voor voorbereiding op testen volgde..

In het geval van een kwalitatieve PCR-analyse voor hepatitis C, is het belangrijk om rekening te houden met de gevoeligheidsdrempel van de reagentia, die schommelt binnen 10-500 IU / ml. Een polymerasekettingreactie van goede kwaliteit kan slechts 2 resultaten opleveren:

  • Positief. De diagnose virale hepatitis C wordt bevestigd door de detectie van flavavirus in het bloed van de patiënt. De concentratie van de ziekteverwekker in het bloedplasma is voldoende om een ​​diagnose te stellen. Als de diagnose na de behandeling werd gesteld, duidt een dergelijk resultaat op de ineffectiviteit van de therapie..
  • Negatief. De ziekteverwekker is afwezig of de concentratie in het bloed is extreem laag. Een dergelijk resultaat duidt niet altijd op de afwezigheid van infectie. De proefpersoon wordt aanbevolen om aanvullende tests te ondergaan voor gevoeligheid voor reagentia.

Om erachter te komen wat de PCR-analyse voor hepatitis C laat zien in kwantitatieve tests, moet u beginnen met de middelste indicator gelijk aan 8x10 ^ 5 IU / ml (800.000 IU / ml).

Als het niveau van de pathogene belasting lager is dan of gelijk is aan het gemiddelde, wordt de patiënt medicamenteuze therapie voorgeschreven op basis van geneesmiddelen met directe antivirale werking. Als het cijfer boven de 800.000 eenheden ligt, zal de behandelende arts moeten nadenken over serieuzere maatregelen om HCV te bestrijden. De patiënt heeft mogelijk een levertransplantatie nodig.

De bepaling van virale hepatitis C door PCR wordt uitgevoerd in veel medische instellingen van de hoofdstad. Tegelijkertijd kunnen tests zowel in een klinische als poliklinische setting worden uitgevoerd..

PCR-analyse voor hepatitis C: waar en hoe het correct door te geven, wat een positief en negatief resultaat betekent

PCR voor hepatitis C is een verplichte analyse bij het onderzoek van een patiënt met symptomen van leverschade. De studie wordt voorgeschreven om de diagnose te bevestigen en de meest volledige informatie te verkrijgen over de veroorzaker van de ziekte, de activiteit van de virale infectie. De resultaten dienen als basis voor het voorschrijven van antivirale therapie, het bepalen van de duur en het evalueren van de effectiviteit ervan..

Diagnostiek met behulp van de polymerasekettingreactietechniek is relatief recentelijk wijdverbreid. Sinds het midden van de jaren zeventig wordt er onderzoek naar dit onderwerp gedaan. Maar de eerste publicaties over de mogelijkheid om PCR in de praktijk te gebruiken, verschenen pas halverwege de jaren tachtig..

  • Soorten PCR
  • Indicaties voor de test
  • Waar te nemen?
  • Regels voor bloeddonatie
  • Het decoderen van de resultaten
  • Voordelen van PCR-diagnostiek
  • De kosten

Bij het uitleggen wat PCR is, benadrukken artsen dat dit de meest betrouwbare en betrouwbare analyse is voor hepatitis C. Met deze test kunnen niet alleen de RNA-deeltjes van het virus worden geïdentificeerd, maar ook de concentratie (geeft de activiteit van het infectieuze proces aan) en het genotype. De verkregen resultaten spelen een sleutelrol bij het bepalen van de tactiek en het schema van verdere therapie..

Wat is de essentie van het opvoeren van een reactie? Met behulp van bepaalde biologisch actieve stoffen wordt een toename van het aantal RNA-deeltjes van het virus in een klein volume bloed bereikt. Vervolgens worden delen van het genoom bepaald door verschillende fysisch-chemische methoden.

PCR wordt uitgevoerd met behulp van verschillende componenten:

  • Primer. Dit is een kunstmatig gesynthetiseerde verbinding waarin de nucleotidesequentie volledig identiek is aan een specifiek gebied van het RNA van het virus, dat geen mutaties en veranderingen ondergaat, afhankelijk van het genotype. Bepaling van RNA van het hepatitis C-virus wordt uitgevoerd met behulp van een strikt specifieke primer.
  • RNA-polymerase. Een enzym dat wordt gekenmerkt door stabiliteit en structurele stabiliteit tegen de achtergrond van temperatuurveranderingen die nodig zijn voor het juiste verloop van een chemische reactie. Biedt de constructie van een RNA-keten in een van de PCR-stadia.
  • Eiwitmengsel. Om extra RNA-secties te bouwen, is 'bouwmateriaal' nodig, waarvoor bepaalde verbindingen van de eiwitstructuur aan het biologische monster worden toegevoegd.
  • Buffer. Een mengsel dat de optimale pH-waarde handhaaft om de stroom van de polymerasekettingreactie te waarborgen.
  • Een monster van biologisch materiaal waarvan wordt vermoed dat het een HCV (hepatitis C-virus) RNA-monster bevat.

Bij sommige methoden voor het stageren van PCR worden bovendien RNA-sondes en andere interne controles gebruikt, die als controlemonsters worden gebruikt bij het identificeren van resultaten.

Het proces van het vergroten van gebieden van viraal RNA met behulp van een matrix wordt amplificatie genoemd. De reactie verloopt in verschillende fasen:

  1. Denatureren. Het proces van het "afwikkelen" van RNA-strengen wordt verzorgd door de temperatuur tot een bepaald niveau te verhogen.
  2. Gloeien. Na het verlagen van de temperatuur tot de vereiste waarden, hechten primers zich aan RNA. Deze fase is alleen mogelijk als de gewenste virusdeeltjes in het bloedmonster aanwezig zijn..
  3. Directe synthese van virale RNA-regio's met de deelname van enzymen.

De vermelde cycli van PCR-stadiëring worden enkele tientallen keren herhaald, wat een veelvoudige toename oplevert van het aantal RNA-regio's van de pathogeen van hepatitis C van het niveau bepaald door laboratoriummethoden.

Het bloedmonster wordt op de juiste manier voorbereid voordat het wordt getest. Het aanwezige RNA wordt geadsorbeerd op een dragerbuffer, vervolgens afgewassen en gebruikt om de polymerasekettingreactie op gang te brengen.

De resultaten worden gedetecteerd door elektroforese (horizontaal of verticaal) of door hybridisatie. De methode voor het decoderen van de resultaten van de reactie wordt gekozen op basis van de doelstellingen van het onderzoek (simpelweg RNA identificeren of de geschatte hoeveelheid bepalen).

PCR - de meest nauwkeurige bloedtest voor hepatitis C

De lijst met voorgestelde onderzoeken voor HCV bevat verschillende items die verschillen in kosten, gereedheidstijd en implementatiemethode..

Verwijzend naar de protocollen van de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO), omvat de procedure voor het diagnosticeren van een infectie verschillende opeenvolgende fasen..

Om te beginnen huren ze:

  • algemene analyse van bloed en urine;
  • bloed biochemie;
  • onderzoek naar glucosegehalte (strikt op een lege maag);
  • HIV-test;
  • fluorografie;
  • immunogram (als u de aanwezigheid van auto-immuunpathologieën vermoedt).

Als de parameters van de biochemische bloedtest afwijken van de fysiologische norm, wordt de patiënt een test voorgeschreven op basis van de detectie van specifieke antilichamen die worden geproduceerd door het contact van het virus met bloed (ELISA).

Maar zo'n bloedtest voor hepatitis C heeft een aanzienlijk nadeel. Het proces van antilichaamsynthese hangt af van de werking en productie van immuuncompetente cellen. De individuele kenmerken van het lichaam kunnen zowel een vals-negatieve als een vals-positieve reactie veroorzaken..

Alvorens een ELISA-test voor te schrijven, vertelt de arts de patiënt over een mogelijke fout, die een antwoordvraag oproept: "Welke bloedtest laat hepatitis C zien met een minimaal risico op onjuiste resultaten?" Om de diagnose te bevestigen of te weerleggen, is de meest nauwkeurige laboratoriumtest real-time PCR.

Verdere actietactieken zijn afhankelijk van wat het onderzoek laat zien. Als de diagnose wordt bevestigd, krijgt de patiënt onmiddellijk hepatoprotectors voorgeschreven, gewaarschuwd voor het belang van goede voeding en een gezonde levensstijl. Maar gerichte therapie is onmogelijk zonder de viral load en het hepatitis C-genotype te bepalen..

Sommige medicijnen kunnen een verergering van hepatitis B veroorzaken. Om complicaties uit te sluiten, worden daarom aanvullend tests op HBsAg voorgeschreven. HCV wordt alleen behandeld na een negatief testresultaat.

Soorten: kwalitatief, kwantitatief en genotypering

Bij de eerste diagnose van hepatitis C wordt de titer van de geproduceerde antilichamen bepaald door de serologische methode. Dit resultaat geeft grofweg de activiteit van het pathologische proces weer. Maar de arts kan de meest nauwkeurige informatie alleen krijgen na bestudering van de PCR-gegevens.

Momenteel wordt in bijna alle laboratoria de analyse uitgevoerd met behulp van een ultragevoelige methode. De diagnose HCV is dus mogelijk binnen 10-14 dagen na infectie, minder vaak - na 2,5-3 weken. Afhankelijk van de doelen die tijdens het onderzoek worden nagestreefd, schrijft de arts een specifiek type test voor.

Er zijn de volgende soorten PCR:

  1. Kwalitatief. Patiënten hebben bij het voorschrijven van diagnostische tests de vraag wat deze onderzoeksmethode laat zien. Kwalitatieve analyse met de PCR-methode is een zeer gevoelige test die de aanwezigheid van virus-RNA in het bloed bij een minimale concentratie vaststelt. Typisch wordt dit soort polymerasekettingreactie uitgevoerd met behulp van reverse transcriptietechnologie. Dit is een van de weinige PCR-methoden waarbij RNA als doelwit kan worden gebruikt.
  2. Kwantitatief. Met de kwantificering van hepatitis C kunt u het exacte niveau van HCV-RNA in uw bloed bepalen. Onderzoek is maar op één manier mogelijk: de real-time methode. Tijdens de voorbereiding van het materiaal voor PCR wordt een kleurstof aan het monster toegevoegd. Na elke amplificatiecyclus wordt een geautomatiseerd, real-time kwantitatief onderzoek uitgevoerd. De techniek wordt vaak uitgevoerd in combinatie met reverse transcriptie. Zo is het mogelijk om kwalitatief het kleine aantal RNA-kopieën van het virus te bepalen. Het is zinvol om het niveau van HCV-RNA kwantitatief vast te stellen als een positief resultaat van kwalitatieve PCR wordt verkregen..
  3. Genotypering. De analyse wordt uitgevoerd in de laatste fase van het diagnostische proces. Het principe van de studie is gebaseerd op het verschil in de nucleotidesequentie, die het ene genotype van het hepatitis C-virus van het andere onderscheidt. Gewoonlijk wordt de analyse gedaan door middel van multi-primer (multiplex) PCR.

Als u een drager van het virus vermoedt, is het noodzakelijk om hoogwaardige PCR uit te voeren. Als het resultaat negatief is, is de persoon waarschijnlijk gezond. Maar om infectie volledig uit te sluiten, wordt aanbevolen om de studie na 7-10 dagen te herhalen. Als het RNA van het virus wordt gedetecteerd, worden verdere tests uitgevoerd (kwantitatief en genotypering).

Indicaties voor een laboratoriumtest

De belangrijkste indicatie voor het doneren van bloed voor hepatitis C door middel van de polymerasekettingreactiemethode is een positieve enzymimmunoassay (ongeacht het type: totaal, gedifferentieerde test voor IgG en IgM).

Bovendien moet u controleren:

  • tijdens de zwangerschap (de test wordt twee keer gedaan - in het eerste trimester en 7-10 weken voor de geboorte);
  • bij het werken met een verhoogd risico op infectie (verpleegkundigen, laboratoriumassistenten, medewerkers van donorcentra, schoonheidsspecialisten, enz.);
  • met promiscue geslachtsgemeenschap en onbeschermd contact met een onbekende persoon;
  • tegen de achtergrond van hiv, kanker, het nemen van bepaalde medicijnen, enz.;
  • patiënten die verslaafd zijn aan intraveneuze medicijnen;
  • met het voortdurend uitvoeren van invasieve diagnostische of therapeutische procedures;
  • met een bloedtransfusie uitgevoerd vóór 1992 (voorheen waren er geen betrouwbare manieren om biologisch donormateriaal te controleren op de aanwezigheid van een virus).
  • wanneer een open wond in contact komt met het bloed van iemand anders, niet-gesteriliseerde medische instrumenten.

De incidentie neemt elk jaar toe. Daarom wordt aanbevolen om voor vroege detectie van infectie eenmaal per jaar laboratoriumtests op HCV uit te voeren..

Waar te testen

Bij contact met de kliniek heeft de patiënt recht op gratis tests. Maar eerst doen ze een ELISA-test. En alleen bij een positief of twijfelachtig resultaat wordt een PCR-studie getoond. Daarom kan een dringende diagnose worden gesteld door contact op te nemen met een betaald laboratorium, waar u bloed kunt doneren voor PCR op een voor de patiënt geschikt tijdstip. Tegelijkertijd wordt aanbevolen om onmiddellijk de indicatoren van leverenzymen, standaard klinische bloedparameters, te controleren.

In de regel is de studie van bloed met PCR in bijna elk laboratorium beschikbaar. Als het bloedinzamelpunt niet is uitgerust met de juiste apparatuur, wordt het biologische materiaal voor onderzoek vervoerd in overeenstemming met het temperatuurregime en andere voorwaarden. PCR in de kliniek is alleen mogelijk na andere onderzoeken, waarvan de resultaten indirect wijzen op de aanwezigheid van hepatitis C.

Hoe bloed correct te doneren

Voordat u bloed doneert voor de detectie van een mogelijk virus, moet u een aantal regels volgen om u voor te bereiden op de analyse..

De belangrijkste aspecten worden in de notitie aangegeven:

  1. Geef gedurende 5-7 dagen de consumptie van vet, gefrituurd voedsel en alcohol op. Over het algemeen raden artsen aan om zich te houden aan de voedingsregels voor dieet nummer 5.
  2. Eet 12-14 uur voor de studie niet. Je kunt alleen water drinken.
  3. Het is beter om 's ochtends bloed te doneren..
  4. Rook niet vóór de ingreep.

U moet de arts ook waarschuwen voor ingenomen medicijnen, mogelijke gezondheidsproblemen, chronische ziekten..

Bloed wordt uit een ader gehaald. Na het einde van de procedure dicht de verpleegkundige de prikplaats af met een steriele pleister, waarschuwt voor de noodzaak om de arm te buigen en deze gedurende 10-15 minuten in deze positie te houden. Anders is de kans op een pijnlijk hematoom groot..

Hoe lang duurt het onderzoek?

Hoeveel analyses worden uitgevoerd, hangt af van het laboratorium. De gemiddelde doorlooptijd varieert van 1-3 dagen. Sommige klinieken bieden een betaalde service voor snelle PCR-tests, maar de tijd wordt beperkt door de mogelijkheden van medische apparatuur..

In de kliniek kunnen de resultaten binnen 7-10 dagen aan de arts worden doorgegeven. Dit gaat gepaard met een grote toestroom van patiënten. Tegelijkertijd wordt biologisch materiaal volgens alle eisen opgeslagen.

Het decoderen van de resultaten

In de regel is het decoderen van PCR van hoge kwaliteit niet moeilijk. Maar om verkeerde interpretaties te voorkomen, moet u een arts raadplegen met het formulier dat u van het laboratorium hebt ontvangen. De opties, wat dit of dat type PCR betekent, worden weergegeven in de tabel.

Negatief: de persoon is gezond of de concentratie van viraal RNA in het bloed is te laag voor detectie.

Positief: de persoon is besmet

Uitgevoerd als virus-RNA wordt gedetecteerd door een kwalitatieve onderzoeksmethode.

Afhankelijk van de verkregen testresultaten wordt het viral load-niveau bepaald

Uitgevoerd voor hepatitis C, bevestigd door andere onderzoeksmethoden.

Met de analyse kunt u het exacte genotype van de pathogeen van de pathologie vaststellen

Maar vaak is er een situatie waarin ELISA voor hepatitis C positief is en PCR negatief. Alleen een arts kan dergelijke testresultaten ontcijferen..

Dergelijke gegevens zijn echter mogelijk in de volgende gevallen:

  • zwangerschap;
  • overgedragen in acute vorm hepatitis C;
  • HCV-behandeling voltooid;
  • de aanwezigheid van infecties die de kans op een vals positief ELISA-resultaat vergroten.

Alleen de polymerasekettingreactie toont de exacte aanwezigheid van een virale infectie in het lichaam. Tegen de achtergrond van een negatieve PCR geeft een positieve ELISA in de meeste gevallen aan dat de persoon niet besmet is. Maar de arts moet de exacte oorzaak van het vals-positieve resultaat bepalen..

Kwalitatieve analyse

Een kwalitatieve PCR-analyse voor hepatitis C bevestigt de aanwezigheid van de ziekteverwekker in het bloed. Als het RNA van het virus niet wordt gedetecteerd, is de persoon gezond. Maar als een infectie wordt vermoed, wordt aanbevolen om het onderzoek opnieuw te ondergaan. Een positief resultaat duidt op infectie. Maar deze analyse laat niet toe om chronische hepatitis C te onderscheiden van acuut, en kan niet aantonen hoe actief het pathologische proces is..

Kwantitatieve test

Kwantitatieve analyse door PCR wordt uitgevoerd na bevestiging van de diagnose en de decodering ervan is belangrijk voor het bepalen van behandelingstactieken. Afhankelijk van de concentratie van deeltjes van de veroorzaker van hepatitis C, worden verschillende graden van virale lading onderscheiden: gemiddeld, hoog en laag. Hoe hoger de indicator, hoe ernstiger de infectie is en hoe moeilijker de therapie is. Normaal gesproken is viraal RNA afwezig in het bloed.

Genotypering

Veel laboratoria voeren genotypering uit in combinatie met kwantitatieve PCR, wat geld bespaart. Zo'n onderzoek wordt maar één keer gedaan, voordat de behandeling wordt gestart. Gewoonlijk wordt analyse uitgevoerd voor een van de vier meest voorkomende genotypen (1, 2, 3 of 4). Tegelijkertijd wordt het HCV-subtype bepaald. Genotypering voor ondersoorten 5 en 6 van hepatitis C is niet in elk laboratorium mogelijk.

Voordelen van PCR-diagnostiek

Diagnostiek met de PCR-methode is wijdverbreid vanwege:

  • hoge nauwkeurigheid (op voorwaarde dat de nieuwste generatie testsystemen worden gebruikt);
  • gemak van bemonstering van biomateriaal;
  • snelle resultaten (maximaal 5 dagen).

Maar het belangrijkste voordeel ligt in de brede diagnostische mogelijkheden van het onderzoek. De analyse maakt het niet alleen mogelijk om het virus te identificeren, maar ook om de concentratie in het lichaam nauwkeurig te bepalen en het genotype van de infectie vast te stellen. Daarnaast is kwantitatief onderzoek nodig om de effectiviteit van antivirale therapie te beoordelen. Het belangrijkste doel van de behandeling is om het testpercentage (d.w.z. het niet-detecteerbare niveau van HCV-RNA) te bereiken na 4, 12 of 24 weken van de antivirale kuur en dit resultaat te behouden..

De kosten

De kosten van PCR-analyse variëren per regio. Dus in Moskou zijn de prijzen hoger. Hoogwaardige PCR kost 600-800 roebel, kwantitatief - 2200-3000 roebel, genotypering - vanaf 1000 roebel. Hoeveel een bepaalde studie precies kost, kun je direct in het laboratorium, op de website van een medische organisatie of telefonisch te weten komen.

Kwalitatieve analyse voor hepatitis C: transcript

De oorzaak van de ontwikkeling van virale hepatitis C is een infectie met een ziekteverwekker die behoort tot de familie Flaviviridae. Er wordt een lang tijdsinterval gedetecteerd tussen infectie en het begin van de productie van antilichamen, waardoor een tijdige diagnose van de ziekte door middel van een enzym-immunoassay niet mogelijk is.

PCR-analyse voor hepatitis C, biochemie, CBC, levertesten worden uitgevoerd als een infectie wordt vermoed. Door de polymerasekettingreactie is het mogelijk om het virus in het bloed te detecteren, zelfs in de eerste week van infectie, wat het dominante voordeel van de methode is.

Kwantitatieve en kwalitatieve analyse voor hepatitis C en kenmerken van de studie, hoe voor te bereiden, of er fouten zijn, decodering - we zullen in detail bespreken.

Wat is de polymerasekettingreactiemethode?

Polymerase-kettingreactie is een moleculaire onderzoekstechniek om het genetisch materiaal van een viraal agens vanaf de eerste dagen van infectie te bepalen. De analyse kenmerkt zich door een hoge mate van betrouwbaarheid, specificiteit en nauwkeurigheid. Dankzij hem wordt niet alleen de afwezigheid / aanwezigheid van het virus gedetecteerd, maar ook de virale lading (kwantitatieve waarde), genotype.

Voor het onderzoek is het bloed van de patiënt nodig, waarin vermoedelijk het RNA van een virale infectie zit. Onder laboratoriumomstandigheden worden primers toegevoegd aan de biologische vloeistof - dit zijn kunstmatig gesynthetiseerde fragmenten van het gewenste gen met een korte lengte. Plus RNA-polymerase - een gespecialiseerd enzym dat de concentratie van het gewenste materiaal vermenigvuldigt.

Verder wordt het bloed met de toevoeging van componenten verschillende keren verwarmd en gekoeld in een speciaal apparaat. Dan komt de analyse van de verkregen resultaten, vergelijking met de bekende genen van het virale agens. Op basis hiervan wordt een conclusie getrokken over de ziekte.

Soorten PCR-onderzoek

Analyse voor hepatitis C PCR wordt uitgevoerd in het laboratorium met de toevoeging van de nodige reagentia, het heeft drie variëteiten met onderscheidende kenmerken:

  1. Kwalitatieve PCR-analyse voor hepatitis C is de eerste fase van het onderzoek. Hierdoor wordt het genetisch materiaal van de ziekteverwekker in het bloedserum gedetecteerd.
  2. Met een kwantitatieve studie kunt u de virale lading schatten - dit is de inhoud van viraal materiaal in 1 ml bloed van een patiënt. Het wordt uitgevoerd voordat de behandeling wordt gestart en vervolgens na 1-4-12 weken therapie. Als de kuur lang is, moet het onderzoek na 24 weken therapie worden uitgevoerd om de effectiviteit te beoordelen.
  3. Genotypering. Een infectieziekte ontwikkelt zich snel, het virus heeft de neiging te muteren. Daarom is het noodzakelijk om het genotype van het virus te identificeren.

Wetenschappers hebben 7 genotypen van het virus geïdentificeerd. In de Russische Federatie komen 1-2-3 soorten veel voor.

Elk van de genotypen wordt gekenmerkt door resistentie tegen behandeling.

Bij type 1 is de effectiviteit van therapie bijvoorbeeld ongeveer 60%, tegen de achtergrond van 2-3 typen bereikt de indicator 85%.

Om de juiste medicijnen te vinden, de duur van de behandeling, moet niet alleen het feit van de infectie worden vastgesteld, maar ook de concentratie van het virus, het genotype ervan.

Indicaties voor

Markers voor hepatitis, PCR en ELISA, andere tests hebben bepaalde medische indicaties:

  • Wanneer een patiënt een voorgeschiedenis heeft van hiv-infectie, aids.
  • Contact met een besmette persoon, omdat virale hepatitis zeer besmettelijk is.
  • Symptomen van cirrotische leverschade - hepatomegalie, een toename van de milt, een veneus patroon verscheen op de buik, enz..
  • Kliniek voor functionele leverdisfunctie - periodieke / constante pijn in het rechter hypochondrium, gele verkleuring van de huid, misselijkheid.
  • Hoge waarden van AST en ALT in de bloedbiochemie.
  • Tijdens de zwangerschap, wanneer de leverfunctietesten slecht zijn.
  • Voordat u een antivirale kuur start om de virale lading te bepalen.
  • Om de effectiviteit van de therapie te volgen.
  • Na therapie om herhaling van virale infectie te voorkomen.

PCR wordt uitgevoerd met een bevestigde diagnose van hepatitis B om een ​​gemengd type leverschade uit te sluiten.

Voorbereiding voor onderzoek en bemonstering

Hoe u zich op de analyse moet voorbereiden, zal de arts u vertellen. Voorbereiding wordt de patiënt aanbevolen om een ​​nauwkeurig resultaat te verkrijgen. Het bestaat uit de volgende aanbevelingen:

  1. De analyse moet 's ochtends op een lege maag worden uitgevoerd. Het is toegestaan ​​om alleen schoon, niet-koolzuurhoudend water te drinken voordat bloed wordt afgenomen. Laatste maaltijd - 8 uur voor het ophalen.
  2. Als u de test 's ochtends niet kunt krijgen, kunt u dit' s avonds of tijdens de lunch doen, het belangrijkste - 5-6 uur na het eten, niet eerder.
  3. Laat alcoholische dranken, cafeïnehoudende dranken en sappen 48 uur voor het onderzoek achterwege.
  4. U dient gedurende 2 dagen een dieet te volgen, waarbij alle schadelijke producten worden uitgesloten. Sommige artsen zijn echter van mening dat vet, gefrituurd voedsel de nauwkeurigheid van de PCR-test niet beïnvloedt..

Gebruik geen medicijnen gedurende 24 uur vóór medische manipulatie. Licht uw arts in als dit niet mogelijk is. Het wordt niet aanbevolen de analyse uit te voeren onmiddellijk na echografie, CT, massage en andere fysiotherapieprocedures.

Bloedafname vindt als volgt plaats:

  • Door middel van een speciale tourniquet die op de onderarm van de patiënt wordt aangetrokken, stopt de arts de veneuze bloedstroom. Aders worden beter zichtbaar, waardoor het gemakkelijker wordt om een ​​naald in te brengen en vervolgens bloed af te nemen.
  • Het gebied van de huid vóór het inbrengen van een steriele naald wordt behandeld met een alcoholhoudende vloeistof.
  • Een naald wordt in de ader gestoken, waarna er een reageerbuis aan wordt bevestigd, waarin bloed stroomt.
  • Na het inbrengen van de naald wordt de tourniquet verwijderd. Verzamel de benodigde hoeveelheid bloed, verwijder de naald.
  • Een wattenstaafje gedrenkt in alcohol wordt op de injectieplaats aangebracht.

Om de vorming van een blauwe plek op de injectieplaats van de naald te voorkomen, is het noodzakelijk om het wattenstaafje hard genoeg op het geblesseerde gebied te drukken, de arm te buigen en deze 3-4 minuten in deze positie te houden.

Als de patiënt medicijnen gebruikt die het bloed verdunnen (aspirine, warfarine), kunnen er bepaalde problemen zijn met het stoppen van bloeden.

Voordelen van PCR ten opzichte van andere tests

De polymerasekettingreactiemethode heeft bepaalde voordelen ten opzichte van andere diagnostische technieken..

De voordelen van het onderzoek worden weergegeven in de tabel:

StudietypeMogelijk resultaat en beoogd transcript
PCR van hoge kwaliteit
Kwantitatief
Genotypering
Directe diagnose van de veroorzaker van pathologieAndere onderzoeken stellen ons in staat om een ​​antwoord te geven - is er een ziekteverwekker in het lichaam of niet. Maar met behulp van PCR-technieken kunt u specifiek het type virale agent vaststellen.
Bestudeer specificiteitPCR detecteert een uniek stukje DNA dat overeenkomt met slechts één type virale agent. Dit minimaliseert de kans op fouten..
Hoge gevoeligheidHet is mogelijk om zelfs een kleine concentratie van het virus in het bloed te detecteren.
Bepaling van alle ziekteverwekkersTijdens het onderzoek kunnen alle ziekteverwekkers worden opgespoord.
Latente infectiesNaast de virale ziekteverwekker kunnen infecties worden opgespoord die een latent verloop hebben en zich onderscheiden door een hoge antigene activiteit..

Wanneer een patiënt een positief resultaat krijgt, betekent dit dat het genetisch materiaal van de veroorzaker van hepatitis in de biologische vloeistof is aangetroffen. Negatief totaal - geen sporen van het virus.

Het decoderen van de resultaten

De arts moet de resultaten ontcijferen op basis van de conclusie die de patiënt in het laboratorium ontvangt. Het is noodzakelijk om de gegevens te analyseren in combinatie met indicatoren van biochemie, CBC, echografie.

Kwalitatief

Een kwalitatief onderzoek zal de aan- of afwezigheid van de veroorzaker van een virale ziekte in het menselijk bloed aantonen. Er kunnen twee opties zijn: negatief (norm) of positief resultaat.

Het formulier zegt soms: gevonden of niet gevonden.

Een positief resultaat - de laboratoriumassistent identificeerde het genetische materiaal van het virale agens in het bloed van de patiënt, de infectie werd bevestigd. Negatieve conclusie - er is geen infectie, de RNA-fragmenten van het virus liggen onder de gevoeligheidslimieten.

Kwantitatief

Kwantitatieve analyse impliceert verschillende opties voor de resultaten. Gemakshalve presenteren we ze in de vorm van een tafel..

ResultaatDecodering
NegatiefDit is de norm voor een gezond persoon. Dit betekent dat er geen viraal hepatitis-RNA in het bestudeerde biologische materiaal zit, of dat de inhoud lager is dan de gevoeligheidsdrempels.
Maximaal 1,8 * 10 ^ 2 IU / mlGeeft aan dat het RNA-gehalte kleiner is dan het kwantificeringsbereik. Dit resultaat moet zorgvuldig worden geïnterpreteerd omdat het als controversieel wordt beschouwd. Bovendien worden er andere onderzoeken uitgevoerd voor latere vergelijking. Herhaal ook de PCR-test.
Maximaal 8 * 10 ^ 5 IU / mlLage virale belasting. Dit resultaat betekent in de regel dat de behandeling effectief is..
Vanaf 8 * 10 ^ 5 IU / mlHoge virale lading. Behandeling is onmiddellijk vereist (indien niet uitgevoerd), of correctie van medicatie is noodzakelijk.
2,4 * 10 ^ 7 IU / mlRNA is groter dan het bovenste kwantificatiemaximum. Tegen deze achtergrond wordt de viral load niet beoordeeld. Een tweede onderzoek met een verdunning van een biologisch vloeistofmonster is vereist.

Genotypering

Resultaat - ribonucleïnezuur van een specifiek genotype werd gevonden. Bovendien worden het genotype en het subtype aangegeven, de laboratoriumassistent codeert de conclusie in Latijnse letters en cijfers. Bijvoorbeeld genotype 1a. In totaal worden 7 genotypen en 67 subtypen onderscheiden.

Resultaat - RNA van het hepatitis C-virus werd gedetecteerd - dit is DNA van een zeldzaam genotype dat niet kan worden toegeschreven aan gewone virale agentia, daarom is aanvullende diagnostiek vereist.

Wanneer PCR negatief is en ELISA positief

Ontcijfert de conclusie van de laboratoriumassistent hepatoloog of specialist infectieziekten. Er is altijd een risico op een vals negatief of vals positief resultaat. Soms komt het voor dat PCR negatief is en ELISA positief.

Dit betekent dat er op dit moment geen virus in het bloed van de patiënt zit, maar dat hij een acute ziekte heeft gehad. Algemeen wordt aangenomen dat ELISA antilichamen vertoont die worden geproduceerd door het immuunsysteem na de invasie van de ziekteverwekker in het lichaam..

ELISA wordt, in vergelijking met PCR, gekenmerkt door een lage betrouwbaarheid en betrouwbaarheid, daarom wordt het gebruikt als primaire screening. Bij het diagnosticeren van virale hepatitis is de polymerasekettingreactie onmisbaar.

De kosten van testen op hepatitis C

U kunt testen doen in het ziekenhuis waar de patiënt wordt geobserveerd, als daar een laboratorium is, of u kunt tegen betaling naar een privécentrum gaan.

In korte tijd kunt u het resultaat krijgen in laboratoriumcentra zoals Gemotest, Invitro, Helix.

Onderzoekskosten afhankelijk van het laboratorium:

Naam van laboratoriumdienstPrijsbeleid
Helix· De kosten voor het bemonsteren van biologisch materiaal - 170 roebel.

Kwalitatief + kwantitatief onderzoek volgens de PCR-methode - 3990 roebel.

Detectie van antilichamen van een virale ziekte - 1.500 roebel (2-3 dagen).

Controle van de activiteit van het virus voordat u met de therapie begint - 4090 roebel.

InvitroKwantitatieve detectie van RNA van het hepatitis C-virus door PCR - 3140 roebel.

Verzameling van biologisch materiaal (veneus bloed) - 199 roebel.

Beoordeling van virale belasting met realtime detectie - 18.000 roebel.

Hoogwaardige ultragevoelige test - vanaf 3000 roebel.

Genotypering - vanaf 1250 roebel.

HemotestKwantitatieve onderzoeksprijs 2200 roebel.

Hoogwaardige diagnostiek vanaf 700 roebel.

Bepaling van het RNA van de ziekteverwekker - vanaf 4000 roebel.

Bloedafname uit een ader ongeveer 150 roebel.

De duur van het onderzoek is gemiddeld 2-3 dagen. In sommige laboratoria is er een service als een urgente analyse, de kosten zijn 1,5-2 keer hoger. Het is ook mogelijk om een ​​medisch specialist thuis te bellen om bloed te doneren en de uitslag per e-mail of persoonlijk te ontvangen wanneer u contact opneemt met het laboratorium..

PCR-diagnostiek voor hepatitis: hoe te ontcijferen, tabel

PCR-analyse voor hepatitis - wat is het en waarom wordt het gedaan

De essentie van PCR-analyse is dat een deel van het onderzochte gen wordt gedwongen zich te vermenigvuldigen in een reageerbuis met behulp van speciale enzymen en omstandigheden. Met PCR-analyse voor hepatitisvirussen kunt u de virusstam bepalen, zonder welke het onmogelijk is om een ​​effectieve behandeling uit te voeren: elk genotype is anders gevoelig voor antivirale geneesmiddelen.

Er worden twee soorten PCR gebruikt:

  • kwalitatief;
  • kwantitatief.

Antivirale therapie vereist constante monitoring om de behandeling tijdig aan te passen; voor deze doeleinden wordt ook de polymerasekettingreactie gebruikt.

Kwalitatieve en kwantitatieve PCR

Kwalitatieve PCR voor hepatitis geeft het antwoord: zit er een virusstam in het bloed van de patiënt en welke. Genotypering is nodig om de diagnose en prognose van de ziekte te verduidelijken en het tijdstip van behandeling te bepalen.

Wanneer de aanwezigheid van het virus wordt bevestigd, wordt kwantitatieve PCR voor hepatitis uitgevoerd, met behulp waarvan het aantal RNA-moleculen in het laboratoriummonster van de patiënt wordt berekend.

Voorbereiding voor PCR-analyse voor hepatitis

Voor de analyse met de polymerasereactiemethode is veneus bloed nodig. Dit moet 's ochtends op een lege maag worden gedaan..

De patiënt moet zich goed voorbereiden op het onderzoek:

  • Gedurende 10 uur om voedsel te weigeren, kun je alleen schoon water drinken.
  • Stop met het drinken van alcohol de dag ervoor, rook 4 uur niet.
  • Fysieke en emotionele stress moet vóór het onderzoek worden vermeden..
  • Gedurende 2 dagen om te stoppen met het gebruik van medicijnen, als dit niet mogelijk is, is het noodzakelijk om de laboratoriumassistent te waarschuwen. Sommige medicijnen hebben invloed op het uiteindelijke resultaat.

PCR-analyse voor hepatitis C

Als de PCR-test voor hepatitis C een positief resultaat geeft, geeft dit aan dat het pathogene micro-organisme zich continu deelt en de levercellen infecteert.

Daaropvolgende kwantitatieve PCR voor hepatitis C wordt gemeten in internationale eenheden per 1 ml of IE / ml, wat betekent hoeveel kopieën van ribonucleïnezuur van een bepaalde stam van het C-virus worden aangetroffen in 1 ml van het testbloed..

De onderstaande tabel toont de decodering van een kwantitatieve studie voor hepatitis C door middel van PCR:

Virale lading, kopieën / mlLoad beoordelingDe aard van de replicatie van de ziekteverwekker
103 en minderHeel laagInactief
104 - 105LaagVaker inactief
106MatigActief
107GrootZeer actief
  1. Een lage virale belasting is een signaal dat de therapeutische behandeling correct is gekozen en dat de prognose voor genezing van hepatitis C gunstig is..
  2. Een hoge concentratie aan virale cellen geeft aan dat de ziekte zich in een acute fase bevindt. Het bloed van de patiënt is een gevaarlijke infectiebron.
  3. De viral load, waarvan de indicatoren op een gemiddeld niveau liggen, kenmerkt ofwel de chronische fase van HVS, of kan twee ontwikkelingstrends hebben: naar de toename of afname ervan.

Kwantitatieve PCR-analyse voor hepatitis C wordt uitgevoerd gedurende de volledige antivirale therapie: na 4, 12 en 24 weken, met als doel de virale belasting te verminderen.

Aan het einde - na 6 maanden is een controle-PCR voltooid.

PCR-analyse voor hepatitis B

PCR-analyse voor hepatitis B (B) wordt uitgevoerd om infectie (HBV-DNA) te detecteren.

De HBV-DNA-concentratie wordt gemeten in kopieën / ml of me / ml. Bij het beoordelen van de resultaten van het onderzoek laten ze zich leiden door de volgende indicatoren:

  • 2x10 ^ 6 - in vijfennegentig procent van de gevallen wordt chronisch.

Decodering van PCR-analyse voor hepatitis

Kwalitatieve PCR-analyse heeft twee antwoorden:

  1. negatief;
  2. positief.

PCR-negatief betekent dat er geen ziekteverwekker is gevonden in de bloedmonsters.

De kans op de betrouwbaarheid van het resultaat is 95%. De overige 5% is een menselijke fout. Deze mogelijkheid is toegestaan ​​vanwege de hoge eisen aan de studie:

  • opslagregels voor reagentia;
  • passende kwalificaties van het medisch personeel;
  • zuiverheid van biomateriaal.

De PCR-kit zelf heeft een diagnostische nauwkeurigheid van 100%.

Met kwantitatieve PCR voor hepatitis kunt u de virale belasting op het lichaam van de patiënt bepalen. Met zijn hulp:

  • het stadium van de ziekte is gespecificeerd (acuut, chronisch);
  • de effectiviteit van antivirale behandeling wordt bepaald;
  • de noodzaak van een leverbiopsie wordt bepaald.

In sommige gevallen voelt de patiënt geen tekenen van de ziekte, terwijl de PCR-methode een infectie heeft vastgesteld. Dit betekent dat de ziekte zich in een vroeg ontwikkelingsstadium of in een chronische vorm bevindt. Om de diagnose te verduidelijken, zijn aanvullende onderzoeken nodig om vroegtijdig met antivirale behandeling te beginnen.

Kosten van PCR-diagnostiek

Overheidsklinieken doen gratis bloedtesten voor PCR als er een verwijzing is van een infectieziektespecialist of hepatoloog.

In alle grote Russische steden worden betaalde services voor PCR-diagnostiek aangeboden. De kosten zijn afhankelijk van het type test, beschikbare apparatuur, timing en andere factoren.

  • Hoogwaardige PCR-analyse in Moskou en Sint-Petersburg kost 600 tot 900 roebel. In de regio's - van 300 tot 800 roebel.
  • Bepaling van de virale belasting van hepatitis C kost 17.000-22.000 roebel. Voor hepatitis B (B) de prijs van een kwantitatief onderzoek: 1200-10000 roebel.

Voordelen en nadelen van de PCR-methode

Wat zijn de voordelen van de polymerasekettingreactiemethode ten opzichte van andere diagnostische methoden?

  1. Breed scala aan toepassingen. Met PCR, met standaardapparatuur, kunt u elk virus identificeren.
  2. De nauwkeurigheid van het bepalen van de ziekteverwekker. Door verschillende combinaties van enzymen en assaytechnieken te gebruiken, wordt een 100% testspecificatie voor de aangegeven infectie bereikt.
  3. Hoge gevoeligheid. Met deze techniek kun je de aanwezigheid van één virusmolecuul in het bloed detecteren.
  4. Efficiëntie. Een kwalitatieve analyse is klaar in een paar uur, een kwantitatieve analyse in twee dagen.
  5. Diagnostiek van het virus tijdens de incubatieperiode. Met PCR wordt de ziekteverwekker niet bepaald door de aanwezigheid van antilichamen, wanneer er al een immuunrespons van het lichaam is, maar vóór het begin van het pathologische proces, wat de behandeling vergemakkelijkt.

De nadelen van PCR-analyse zijn een gevolg van de voordelen:

  • voor de zuiverheid van de analyse is de hoogste graad van zuiverheid vereist, inclusief de lucht in het laboratorium, zodat "vreemd" DNA niet in het te onderzoeken monster terechtkomt;
  • hoge eisen aan personeel dat bemonstering en analyse van biomateriaal uitvoert.

De beoordeling van de verkregen resultaten moet worden gedaan door de behandelende arts, die weet hoe hij de echte test moet scheiden van de vals-positieve test (als de behandeling al is voltooid, maar er een niet-levensvatbaar virus in het bloed blijft) en vals-negatief (als het virus niet wordt gedetecteerd in het klinische beeld)..

PCR-analyse voor hepatitis C

Om de diagnose chronische virale hepatitis C (CVHC) te stellen, is een uitgebreid onderzoek van een persoon vereist, inclusief klinische, laboratorium- en instrumentele onderzoeken. Vanuit diagnostisch oogpunt is de PCR-methode - polymerasekettingreactie belangrijk voor het stellen van een juiste diagnose..

Wat deze analyse laat zien en waarom is het nodig?

Deze laboratoriummethode detecteert hepatitis C-virus-RNA in menselijk bloed. Samen met enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) voor antilichamen tegen het virus, wordt PCR gebruikt om chronische hepatitis C en het genotype van de veroorzaker ervan te diagnosticeren. Deze studie is een van de nieuwste diagnostische methoden in het laboratorium. De betrouwbaarheid ervan bij CVHC bedraagt ​​meer dan 97%, wat als een zeer goede indicator voor onderzoek wordt beschouwd.

Er zijn drie PCR-bloedtesten voor chronische hepatitis C: kwalitatieve, kwantitatieve en genotypering van het virus. De eerste studie (kwalitatieve analyse) voor het virus detecteert het in het bloed, daarom wordt het alleen gebruikt voor het stellen van een diagnose.

De tweede (kwantitatieve) studie bepaalt de mate van virale belasting op het lichaam en wordt daarom gebruikt om de effectiviteit van therapie te controleren.

De derde PCR (genotypering) verduidelijkt de diagnose door het genotype van het virus vast te stellen, wat erg belangrijk is voor de benoeming van de juiste antivirale behandeling.

De essentie van de polymerasekettingreactietechniek is het gebruik van enzymen die het genetisch materiaal van de ziekteverwekker in het biomateriaal vermenigvuldigen. Tijdens een dergelijke replicatie wordt een reageerbuis met bloed verschillende keren verwarmd en afgekoeld tot een temperatuur die nodig is om de enzymatische reactie te versnellen. Als gevolg van deze manipulaties neemt de hoeveelheid van het virale genoom vele malen toe, waardoor het zelfs met een minimale hoeveelheid kan worden gedetecteerd.

PCR-diagnostiek heeft veel voordelen ten opzichte van andere laboratoriumtests:

  • hoge gevoeligheid - 97-98%;
  • gegarandeerde analytische specificiteit (identificeert precies de ziekteverwekker die u wilt vinden, en niet de verwante stam);
  • snelheid van uitvoering (het duurt niet langer dan 2 dagen om een ​​mening te krijgen).

Drie soorten PCR-analyses

Hoogwaardige PCR-analyse wordt voorgeschreven voor alle patiënten bij wie antilichamen tegen het CVHC-virus werden gedetecteerd door ELISA-analyse. Na het uitvoeren van kwalitatieve PCR, kunnen twee varianten van het antwoord worden verkregen: "RNA gedetecteerd" of "RNA niet gedetecteerd". Om de minimale hoeveelheid virus in het bloed te detecteren, zijn testsystemen met een gevoeligheid van ten minste 50 IE / ml vereist. Als de concentratie van het virus in het bloed van de patiënt lager is dan het diagnosticum kan bepalen, kan het testresultaat vals-negatief zijn. Om een ​​dergelijke diagnostische fout te voorkomen, moeten laboratoria die PCR-diagnostiek uitvoeren, worden voorzien van zeer gevoelige testsystemen. In het laboratorium "Invitro" worden bijvoorbeeld tests met een gevoeligheid van 15 IU / ml gebruikt. Laboratoriummedewerkers zijn verplicht om op eerste verzoek informatie over de gevoeligheid van tests te verstrekken aan patiënten en artsen..

Kwantitatieve PCR-analyse bepaalt de mate van viremie, dat wil zeggen de concentratie van het pathogeen in het bloed, de virale lading. Het resultaat van deze studie wordt, in tegenstelling tot een kwalitatieve PCR, uitgedrukt in cijfers, bijvoorbeeld 2 × 10 * 6 IU / ml, wat 2 miljoen internationale eenheden in 1 ml bloed betekent. Sommige laboratoria gebruiken een andere indicator: het aantal kopieën / ml. Deze twee indicatoren zijn eenvoudig om te rekenen: 1 internationale eenheid is gelijk aan 4 kopieën van RNA. Dus 2 × 10 * 6 IU / ml betekent dat 8 × 10 * 6 kopieën van viraal RNA in 1 ml worden aangetroffen in het bloed van de patiënt, d.w.z. 8 miljoen exemplaren in 1 ml bloed.

Genotypering is de definitie van een van de zes genotypen van een virus. Het klinische beeld, de mate waarin complicaties van de lever zich ontwikkelen en de prognose voor het latere leven van de patiënt hangen af ​​van het genotype van de ziekteverwekker. Het genotype van het virus is al in het stadium van de diagnose erg belangrijk, omdat de combinatie van medicijnen en de duur van de therapeutische cursus die aan de patiënt zal worden voorgeschreven, afhangen van de juiste definitie..

Maar zelfs zo'n schijnbaar 'ideale' laboratoriumstudie heeft zijn nadelen:

  • tijdens de studie vindt de replicatie van het genetisch materiaal van alle pathogenen, zelfs levenloze, plaats, wat het resultaat kan verstoren. Om de effectiviteit met behulp van PCR te bewaken, wordt de herhaalde analyse daarom niet eerder dan 2 maanden na de vorige uitgevoerd, zodat de dode virussen de tijd hebben om het lichaam van de patiënt te “verlaten”;
  • een deel van het virale genoom, dat wordt bepaald met testsystemen, kan theoretisch aanwezig zijn in andere virussen of micro-organismen, dus er is een mogelijkheid van een vals-positieve reactie;
  • virussen muteren snel. Soms is de snelheid en mate van mutatie van het virus zo hoog dat het testsysteem niet langer hun genoom vastlegt. Als gevolg hiervan is een vals negatief resultaat mogelijk..

Om deze tekortkomingen te verhelpen, voeren fabrikanten van laboratoriumtestsystemen voor PCR-diagnostiek voortdurend hun tests uit, ook op kruisreacties en op gevoeligheid voor een bepaald genotype van het virus..

Hoe een PCR-test voor hepatitis C te doen?

Om ervoor te zorgen dat de conclusie van het onderzoek met de PCR-methode betrouwbaar is, is het noodzakelijk om de voorbereidingsregels voor het gedrag ervan strikt te volgen:

  • de studie wordt uitgevoerd op een lege maag (glucose, vetten, mineralen die via de voeding in de bloedbaan terechtkomen, kunnen de snelheid en kwaliteit van de enzymatische reactie beïnvloeden);
  • de afstand tussen de laatste maaltijd en de bloedafname voor analyse moet minimaal 8 uur zijn;
  • aan de vooravond van de studie is het verboden om alcohol te gebruiken en vet voedsel te eten, waarvan de eliminatieperiode lang duurt;
  • een dag voordat u naar het laboratorium gaat, moet sterke fysieke en emotionele stress worden vermeden;
  • roken wordt niet aanbevolen tot bloedafname.

Om valse conclusies te voorkomen, moet de vermeende patiënt iets eerder naar het laboratorium komen dan dat het bloed wordt afgenomen. Het duurt 15-20 minuten voordat iemand op adem komt en kalmeert. De adrenaline in het bloed na stevig wandelen kan het testresultaat beïnvloeden.

Als de ter analyse verzonden patiënt medicijnen gebruikt, moet hij dit aan de arts melden. Het is mogelijk dat u sommige hiervan een tijdje moet weigeren (indien mogelijk).

Het resultaat van de PCR-analyse voor hepatitis C

Het ontcijferen van de resultaten wordt uitgevoerd door de laboratoriumassistent van het laboratorium dat de analyse heeft uitgevoerd. Decodering is een definitie van de afwijking van het resultaat van de norm. De norm van indicatoren wordt rechtstreeks bepaald door de fabrikant van het testsysteem, dat door het laboratorium wordt gebruikt voor diagnostiek. Daarom zou het niet moeten verbazen dat in sommige laboratoria de virale lading wordt bepaald in IE / ml en in andere - in kopieën / ml..

Als u een conclusie hebt ontvangen, moet u deze correct kunnen interpreteren. De interpretatie van de studieresultaten moet worden behandeld door de behandelende arts van een patiënt met hepatitis C. Pas na een objectief, instrumenteel en laboratoriumonderzoek van de patiënt kan de arts voldoende gegevens verkrijgen voor een competente interpretatie van de verkregen PCR-resultaten..

Het beoordelen van een kwalitatieve analyse is over het algemeen eenvoudig, zelfs voor patiënten. Er kan maar één resultaat zijn: "gevonden" of "niet gevonden". Bovendien is de tweede de norm.

Kwantitatieve analyse is moeilijker te interpreteren. Het toont de mate van virale belasting van de patiënt. Zelfs onder hepatologen bestaat er geen consensus over de interpretatie van de gedetecteerde viremie. De meeste artsen zijn geneigd te geloven dat een belasting van meer dan 8 × 10 * 5 IU / ml als hoog moet worden beschouwd. Een zeer hoge belasting wordt beschouwd als meer dan 1 × 10 * 7 IU / ml, en een lage belasting is minder dan 4 × 10 * 5 IU / ml..

De mate van viral load geeft de virulentie (agressiviteit) van het virus aan: hoe meer het in het bloed zit, hoe sneller complicaties van de lever kunnen optreden. Een hoge concentratie van het virus in het bloed van een zwangere vrouw verhoogt de kans dat het door de bloedplacentabarrière naar de foetus dringt. Viremie beïnvloedt ook de effectiviteit van de behandeling: bij lage aantallen is de effectiviteit van therapie hoger dan bij hoge.

Om zeker te zijn van de betrouwbaarheid van de PCR-analyse voor hepatitis C, zou de voorkeur alleen moeten worden gegeven aan die laboratoria die zichzelf goed hebben bewezen. Tegelijkertijd mag het prijsbeleid geen hoofdrol spelen..